剛剛，國家藥監(jiān)局器審中心發(fā)布了《基孔肯雅病毒核酸檢測試劑技術(shù)審評要點(diǎn)（試行）》，全文如下：

 

基孔肯雅病毒核酸檢測試劑技術(shù)審評要點(diǎn)

（試行）

 

本審評要點(diǎn)旨在指導(dǎo)注冊申請人開展基孔肯雅病毒核酸檢測試劑的設(shè)計開發(fā)工作，準(zhǔn)備產(chǎn)品注冊申報資料，同時也為技術(shù)審評部門提供參考。

本審評要點(diǎn)是對基孔肯雅病毒核酸檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用。若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化。

 

一、適用范圍

本審評要點(diǎn)適用于基孔肯雅病毒核酸檢測試劑注冊申請和變更注冊申請的情形，其他未盡事宜應(yīng)當(dāng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家藥品監(jiān)督管理局公告2021年第122號）等相關(guān)法規(guī)的要求，同時建議參考《定性檢測體外診斷試劑分析性能評估注冊審查指導(dǎo)原則》、《體外診斷試劑主要原材料研究注冊審查指導(dǎo)原則》等適用的技術(shù)文件要求。

 

二、注冊審查要點(diǎn)

（一）產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗報告

注冊申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評價等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)（如有）、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)資料，結(jié)合產(chǎn)品特性，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（2022年第8號）的要求編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。該類產(chǎn)品作為第三類體外診斷試劑，應(yīng)當(dāng)以附錄形式明確主要原材料以及生產(chǎn)工藝要求。

基孔肯雅核酸檢測試劑如有國家標(biāo)準(zhǔn)品，技術(shù)要求中應(yīng)體現(xiàn)國家標(biāo)準(zhǔn)品的相關(guān)要求，并使用國家標(biāo)準(zhǔn)品對三批產(chǎn)品進(jìn)行檢驗。

基孔肯雅病毒核酸檢測試劑的檢出限水平應(yīng)符合國家相關(guān)指南文件規(guī)定，申報產(chǎn)品對國家靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品（如有）的檢測結(jié)果應(yīng)與聲稱的檢出限水平相當(dāng)。

如有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)內(nèi)容應(yīng)不低于相應(yīng)的要求。

（二）分析性能研究

注冊申請人應(yīng)采用在符合質(zhì)量管理體系的環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行分析性能研究，提交具體研究方法、試驗方案、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析結(jié)果等詳細(xì)資料。

如申報產(chǎn)品適用不同的機(jī)型，需要提交采用不同機(jī)型進(jìn)行性能評估的資料。如申報產(chǎn)品包含不同的包裝規(guī)格，需要對各包裝規(guī)格進(jìn)行分析或驗證。

如果試劑同時適用于血清和血漿樣本類型，可選擇具有統(tǒng)計學(xué)意義數(shù)量的樣本進(jìn)行不同樣本類型一致性的同源比對研究。

分析性能評估所用樣本的基本信息均需明確，例如樣本來源、樣本類型、采集和處理方式、稀釋方式、定值過程及數(shù)據(jù)等。

分析性能評估用樣本一般應(yīng)為真實樣本，如需稀釋，應(yīng)采用陰性樣本進(jìn)行稀釋。

建議著重對以下分析性能進(jìn)行研究。

1.樣本穩(wěn)定性

2.核酸（RNA）提取/純化性能

在進(jìn)行核酸檢測之前，建議有核酸提取/純化步驟。該步驟的目的除最大量分離出目的RNA外，還應(yīng)有相應(yīng)的純化作用，盡可能去除PCR抑制物。對配合使用的所有核酸提取試劑進(jìn)行提取核酸純度、濃度、提取效率的研究，并與質(zhì)量較好的核酸提取試劑進(jìn)行平行比對。若產(chǎn)品適用兩種或以上核酸提取試劑，則每一種核酸提取試劑均需配合檢測試劑進(jìn)行抗干擾、精密度和檢出限的驗證。

3.精密度

應(yīng)對精密度指標(biāo)，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)等的評價標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求。應(yīng)考慮運(yùn)行、時間、操作者、儀器、試劑批次和地點(diǎn)等影響精密度的條件，設(shè)計合理的精密度試驗方案進(jìn)行評價。精密度評價試驗應(yīng)包含核酸提取步驟。設(shè)定合理的精密度評價周期，例如為期至少20天的檢測。對檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，獲得重復(fù)性、實驗室內(nèi)精密度、實驗室間精密度、批間精密度等結(jié)果。

應(yīng)至少包含3個水平：陰性樣本、臨界陽性樣本、中/強(qiáng)陽性樣本，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫螅纾?/p>

陰性樣本：待測物濃度為零濃度，陰性檢出率應(yīng)為100%（n≥20）。

臨界陽性樣本：待測物濃度略高于試劑盒的檢出限，陽性檢出率應(yīng)≥95%（n≥20）。

中/強(qiáng)陽性樣本：待測物濃度呈中度到強(qiáng)陽性，陽性檢出率為100%且Ct值的CV≤5%（n≥20）。

4.分析特異性

4.1交叉反應(yīng)

4.1.1生物信息學(xué)分析

分析應(yīng)當(dāng)包括人基因組和其他近緣病毒、引起發(fā)熱、關(guān)節(jié)疼痛、出疹等相似癥狀的病原體。

4.1.2樣本驗證

采用滅活的臨床樣本或添加了滅活病原體培養(yǎng)物的陰性臨床樣本進(jìn)行驗證，樣本基質(zhì)應(yīng)與預(yù)期檢測樣本類型一致，交叉反應(yīng)研究用樣本主要考慮以下幾方面：

4.1.2.1發(fā)熱伴出疹相關(guān)病原體

登革病毒（DENV-1～DENV-4）、辛德畢斯病毒、蓋塔病毒、黃熱病毒、寨卡病毒、麻疹病毒、風(fēng)疹病毒、乙型腦炎病毒*、水痘-帶狀皰疹病毒*、單純皰疹病毒*、細(xì)小病毒B19*、人類皰疹病毒6*、人類皰疹病毒7*、肺炎衣原體*、志賀氏菌*、淋球菌*、溶血性鏈球菌*、立克次體*。

注：“*”項為選擇性驗證的病原體，可在其中選擇不少于9個進(jìn)行驗證。

4.1.2.2可能在血液樣本中存在的其他常見病原體

乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、EB病毒、人巨細(xì)胞病毒。

4.1.2.3高濃度人類基因組DNA

病毒培養(yǎng)液的濃度單位可采用TCID50或PFU/mL，細(xì)菌培養(yǎng)物濃度單位可采用CFU/mL。建議在病毒和細(xì)菌感染的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗證。通常，細(xì)菌感染的水平為106 CFU/mL或更高，病毒為105 PFU/mL或更高，也可采用其他合理的方法對病原體濃度進(jìn)行定值，提交相關(guān)依據(jù)。

申請人應(yīng)提供所有用于交叉反應(yīng)驗證的病毒和細(xì)菌的來源、種屬/型別信息和濃度確認(rèn)等試驗資料。

4.2干擾

4.2.1干擾物質(zhì)研究

應(yīng)根據(jù)所采集樣本類型，針對可能存在的內(nèi)源/外源物質(zhì)干擾情況進(jìn)行驗證，驗證推薦物質(zhì)見表1。建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進(jìn)行試驗，檢測包含臨界陽性水平在內(nèi)的基孔肯雅病毒樣本。對結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計分析，對比添加干擾物質(zhì)前后的Ct值差異。檢測的潛在干擾物包括樣本中的原有物質(zhì)及在樣本采集和處理期間引入的物質(zhì)。

表1 用于干擾試驗的物質(zhì)

抗病毒藥：如利巴韋林

解熱鎮(zhèn)痛藥：如對乙酰氨基酚

抗生素：如阿莫西林

激素類藥物：如地塞米松

抗凝劑：如肝素

內(nèi)源性干擾物質(zhì)：血紅蛋白、甘油三酯、白蛋白、膽紅素等

4.2.2病原體干擾研究

應(yīng)充分考慮臨床上容易與基孔肯雅病毒合并感染的病原體（如登革病毒等）及“4.1.1”中經(jīng)生物信息學(xué)分析顯示存在較高同源性的病原體，在高濃度的情況下對低濃度（例如檢出限濃度）基孔肯雅病毒核酸檢測的影響，進(jìn)行干擾研究。

5.檢出限

5.1檢出限的確定

建議采用至少3個樣本系列稀釋于與適用樣本一致的基質(zhì)中，進(jìn)行檢出限的確定。每個濃度梯度重復(fù)檢測，記錄不同濃度檢出的結(jié)果，采用適當(dāng)?shù)哪Ｐ停ㄈ鏟robit分析）和分析方法，將具有95%陽性檢出率的最低濃度水平作為確定的檢出限。

5.2檢出限的驗證

選擇另外3個不同來源的樣本在檢出限濃度水平進(jìn)行驗證，應(yīng)達(dá)到95%陽性檢出率。

如檢測試劑包括多個可單獨(dú)報告的檢測靶標(biāo)，應(yīng)分別進(jìn)行檢出限研究。

6.包容性

6.1應(yīng)當(dāng)采用生物信息學(xué)分析方法對產(chǎn)品檢測的包容性進(jìn)行研究，對所有已公布的基孔肯雅病毒核酸序列進(jìn)行序列比對分析，并對靶標(biāo)范圍內(nèi)的序列差異是否影響申報產(chǎn)品檢出能力進(jìn)行分析驗證。

6.2驗證至少10個不同來源的臨床陽性樣本。研究應(yīng)包括檢出限和重復(fù)性的驗證。

6.3基因型覆蓋

應(yīng)對基孔肯雅病毒主要基因型，包括西非型、東中南非型（包含印度洋分支）、亞洲型及其他流行變異株進(jìn)行包容性研究。研究可采用毒株或臨床樣本，如果樣本難以獲得，亦可采用假病毒。

7.企業(yè)參考品驗證

根據(jù)主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設(shè)置情況，采用三批產(chǎn)品對企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗并提供詳細(xì)的試驗數(shù)據(jù)。

（三）主要原材料研究

1.應(yīng)詳述引物和探針的設(shè)計原則，提供引物、探針核酸序列、模板核酸序列及兩者的對應(yīng)情況。提供檢測靶標(biāo)的詳細(xì)確定依據(jù)。

2.企業(yè)參考品制備

申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品性能驗證的實際情況自行設(shè)定企業(yè)參考品，包括陽性參考品、陰性參考品、檢出限參考品、精密度參考品。企業(yè)參考品應(yīng)采用臨床樣本或者使用病毒培養(yǎng)物加入陰性樣本制備，不宜采用質(zhì)粒、假病毒、基因組提取/純化物等核酸制備。企業(yè)參考品的設(shè)置建議如下：

陽性參考品應(yīng)包含不同濃度水平基孔肯雅病毒陽性滅活毒株或臨床樣本。

陰性參考品則主要涉及對特異性的驗證情況，建議至少包括登革病毒、麻疹病毒等相似癥狀病原體，生信分析顯示同源性較高的病原體和干擾樣本。

檢出限參考品應(yīng)包含95%陽性檢出水平或略高于檢出限水平的陽性滅活毒株或臨床樣本，如100%陽性檢出水平。

精密度參考品應(yīng)至少包含兩個濃度水平，其中包含弱陽性水平。

（四）其他

主要原材料研究的其他內(nèi)容、生產(chǎn)工藝、反應(yīng)體系、穩(wěn)定性、陽性判斷值等研究資料，可參考其他病原體核酸檢測試劑指導(dǎo)原則進(jìn)行研究。

（五）臨床評價

1.臨床試驗機(jī)構(gòu)

建議申請人在相關(guān)流行病學(xué)多發(fā)區(qū)域選擇臨床試驗機(jī)構(gòu)，應(yīng)是經(jīng)備案的醫(yī)療器械臨床試驗機(jī)構(gòu)（包括各級疾病預(yù)防控制中心）。臨床試驗機(jī)構(gòu)數(shù)量應(yīng)不少于3家，且具有分子生物學(xué)方法檢測的優(yōu)勢，實驗操作人員應(yīng)有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個試驗中，試驗體外診斷試劑和對比方法/試劑均應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

2.臨床試驗設(shè)計

2.1 對于新的基孔肯雅病毒核酸檢測試劑

2.1.1 與臨床參考方法的比較

申請人可采用核酸序列測定方法（臨床參考方法）作為對比方法，驗證試驗體外診斷試劑檢測結(jié)果與核酸序列測定（如：一代測序）結(jié)果之間的一致性。

臨床試驗資料中應(yīng)對測序方法進(jìn)行詳細(xì)的介紹，并提交性能驗證數(shù)據(jù)，證明測序方法與試驗體外診斷試劑的可比性。同時，還應(yīng)提交測序引物和測序所擴(kuò)增區(qū)段的生信分析資料，以確定測序區(qū)段對于基孔肯雅病毒核酸序列的特異性。

如測序試驗委托其他機(jī)構(gòu)完成，還應(yīng)提交由臨床試驗機(jī)構(gòu)委托第三方機(jī)構(gòu)/實驗室開展相關(guān)試驗的測序服務(wù)合同/協(xié)議。受托機(jī)構(gòu)/實驗室應(yīng)具有相應(yīng)檢測能力和資質(zhì)。

2.1.2 與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)的比較

除上述比對試驗外，還應(yīng)考慮試驗體外診斷試劑與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對比。臨床參考標(biāo)準(zhǔn)即按照相關(guān)管理部門發(fā)布的《基孔肯雅熱防控技術(shù)指南（2025年版）》和《基孔肯雅熱診斷衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（WS/T 590-2018）》文件進(jìn)行病例診斷的方法。

2.2 對于已有同類產(chǎn)品上市的情形

如有已上市同類產(chǎn)品，臨床試驗可選擇已上市的同類產(chǎn)品作為對比試劑，對比試劑的選擇應(yīng)考慮樣本類型、產(chǎn)品性能等方面與試驗體外診斷試劑具有良好的可比性。

申請人亦可以參照上述2.1部分進(jìn)行臨床試驗設(shè)計。

3.臨床試驗入組人群

臨床試驗的入組人群應(yīng)為產(chǎn)品的預(yù)期適用人群，該產(chǎn)品的適用人群為基孔肯雅熱的疑似病例，申請人在進(jìn)行臨床試驗時應(yīng)依據(jù)相關(guān)管理部門發(fā)布的《基孔肯雅熱防控技術(shù)指南（2025年版）》和《基孔肯雅熱診斷衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（WS/T 590-2018）》文件中對“疑似病例”的定義入組病例。

另外，臨床試驗建議納入一定數(shù)量的弱陽性樣本。弱陽性樣本應(yīng)采用合理方法確定，一般將Ct值小于cutoff值3～5個Ct值的樣本定義為弱陽性樣本，應(yīng)采用對比試劑或臨床診療過程中所用的適當(dāng)?shù)姆椒ù_定弱陽性。

4.臨床試驗樣本類型

臨床樣本的采集建議按照《基孔肯雅熱防控技術(shù)指南（2025年版）》等文件進(jìn)行。

該類試劑可能涉及的樣本類型包括血清和血漿。針對血清和血漿樣本，如非臨床研究數(shù)據(jù)證明兩種樣本類型之間幾乎不存在差異，則臨床試驗中可將兩種樣本類型進(jìn)行匯總統(tǒng)計。

5.臨床試驗樣本量

與對比方法/試劑比較研究的臨床試驗樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計學(xué)要求，可采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計學(xué)方法進(jìn)行估算。臨床試驗可依據(jù)試驗體外診斷試劑相對于對比方法/試劑的陰陽性符合率分別估算最低陰陽性樣本例數(shù)。

臨床樣本量的估算建議采用如下樣本量公式計算，

《基孔肯雅病毒核酸檢測試劑技術(shù)審評要點(diǎn)（試行）》正式發(fā)布

公式中，n為樣本量；Z1-α/2、Z1-β為顯著性水平和把握度的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分?jǐn)?shù)位，P0為評價指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，PT為試驗體外診斷試劑評價指標(biāo)預(yù)期值。

其中，陰陽性符合率的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P0）建議不低于90%。獲得臨床試驗數(shù)據(jù)后，證明產(chǎn)品相對于對比方法的陰陽性符合率（置信區(qū)間下限）不低于預(yù)設(shè)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P0）。當(dāng)評價指標(biāo)P接近100%時，上述樣本量估算方法可能不適用，應(yīng)考慮選擇更加適宜的方法進(jìn)行樣本量估算和統(tǒng)計學(xué)分析，如精確概率法等。

與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)的比較研究，建議參考與對比方法/試劑比較研究部分的樣本量估算方法，并設(shè)定合理的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)。

6.臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計分析

臨床試驗結(jié)果一般以四格表的形式進(jìn)行總結(jié)，并據(jù)此計算試驗體外診斷試劑與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)比較時的靈敏度和特異度及其95%置信區(qū)間，或與對比方法/試劑比較時的陽性/陰性符合率及其95%置信區(qū)間。應(yīng)將試驗體外診斷試劑檢測結(jié)果與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)的一致性、試驗體外診斷試劑與對比方法/試劑檢測結(jié)果一致性分別進(jìn)行統(tǒng)計分析。

臨床試驗報告中應(yīng)對入組受試者的基本情況進(jìn)行分析，包括受試者年齡、性別的分布情況，以及臨床診斷背景等，確認(rèn)入組樣本具有較好的代表性。

臨床試驗中所有不一致結(jié)果均應(yīng)結(jié)合患者的流行病學(xué)背景、臨床癥狀、臨床診斷以及疾病治療、轉(zhuǎn)歸等信息進(jìn)行充分的分析。臨床試驗結(jié)果應(yīng)能夠證明產(chǎn)品臨床性能滿足臨床要求。

7. 境外臨床試驗數(shù)據(jù)的認(rèn)可

境外臨床試驗數(shù)據(jù)應(yīng)符合《接受醫(yī)療器械境外臨床試驗數(shù)據(jù)技術(shù)指導(dǎo)原則》和《使用體外診斷試劑境外臨床試驗數(shù)據(jù)的注冊審查指導(dǎo)原則》的相關(guān)要求。提交完整的臨床試驗方案、報告和倫理審查意見，以及該數(shù)據(jù)適用于中國患者人群的論證資料、境內(nèi)外臨床試驗質(zhì)量管理差異的對比資料和臨床試驗質(zhì)量管理差異對于臨床試驗結(jié)果影響的論證資料。

注冊申請人應(yīng)根據(jù)上述臨床試驗技術(shù)審評要求，論證境外臨床試驗數(shù)據(jù)的充分性。

8. 臨床證據(jù)的形式要求

申請人應(yīng)按照《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》等法規(guī)文件要求提交各機(jī)構(gòu)倫理審查意見、臨床試驗方案、臨床試驗小結(jié)、臨床試驗報告以及臨床試驗數(shù)據(jù)庫。

臨床試驗數(shù)據(jù)匯總表作為臨床試驗小結(jié)的附件提交。數(shù)據(jù)表中應(yīng)包括檢測病例的編號、年齡、性別、樣本類型、臨床診斷背景信息、試驗體外診斷試劑檢測結(jié)果（含各基因的Ct值）、對比方法/試劑的檢測結(jié)果（各基因的Ct值）和臨床診斷結(jié)果等。臨床應(yīng)用的數(shù)據(jù)集中每一病例編號應(yīng)能夠溯源。

（六）產(chǎn)品說明書

產(chǎn)品說明書格式應(yīng)滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求。產(chǎn)品說明書中技術(shù)內(nèi)容應(yīng)與注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，應(yīng)以規(guī)范格式進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。其中，有關(guān)說明書的【預(yù)期用途】建議如下：

本試劑盒用于體外定性檢測基孔肯雅熱病疑似病例、其他需要進(jìn)行基孔肯雅熱感染診斷或鑒別診斷者的xx樣本中基孔肯雅病毒核酸。

有關(guān)“疑似病例”等人群的定義參照《基孔肯雅熱防控技術(shù)指南》等文件執(zhí)行。

該產(chǎn)品在使用上應(yīng)當(dāng)遵守《基孔肯雅熱防控技術(shù)指南》等文件的相關(guān)要求。

開展基孔肯雅病毒核酸檢測，應(yīng)符合《基孔肯雅熱防控技術(shù)指南》等的要求，做好生物安全工作。

本試劑盒檢測結(jié)果僅供臨床參考，不得作為臨床診斷的唯一標(biāo)準(zhǔn)。建議結(jié)合患者臨床表現(xiàn)和其他實驗室檢測對病情進(jìn)行綜合分析。

 

 

 

 

 

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