摘 要 / Abstract

為進一步加強二代基因測序相關體外診斷試劑類產(chǎn)品監(jiān)督管理，推動產(chǎn)業(yè)高質量發(fā)展，國家藥品監(jiān)督管理局組織制定了《二代基因測序相關體外診斷試劑分類界定指導原則》。該原則是二代基因測序相關體外診斷試劑制造商和相關監(jiān)管人員開展工作的重要依據(jù)。本文介紹了該原則的制定背景，并對重點內容進行了解讀和探討，旨在幫助相關人員準確理解，進而統(tǒng)一我國二代基因測序相關體外診斷試劑的分類管理標準。

關 鍵 詞 / Key words

體外診斷試劑；二代基因測序；分類界定；指導原則；分類管理

2025 年6 月， 國家藥品監(jiān)督管理局（以下簡稱國家藥監(jiān)局）發(fā)布《 二代基因測序相關體外診斷試劑分類界定指導原則》（以下簡稱《指導原則》）[1]，旨在應對二代基因測序（next-generation sequencing，NGS）技術快速發(fā)展帶來的監(jiān)管適配性問題，推動產(chǎn)業(yè)規(guī)范化發(fā)展。該文件與《體外診斷試劑分類目錄》及配套通告[2-4]形成協(xié)同監(jiān)管體系，標志著我國針對NGS 相關體外診斷試劑的監(jiān)管工作邁入“包容創(chuàng)新、風險精細化管控” 新階段?！吨笇г瓌t》的核心要點在于統(tǒng)一分類標準，明確提出以技術功能分類法替代傳統(tǒng)的產(chǎn)品形態(tài)分類法，將NGS 相關體外診斷試劑根據(jù)核心功能單元拆分為核酸提取純化、文庫構建、測序反應3 個模塊，并確立以靶標識別能力作為類別判定的核心依據(jù)。本文將圍繞《指導原則》的制定背景及主要內容展開介紹和解析。

01《 指導原則》制定背景

NGS 技術發(fā)展迅速，其相關體外診斷試劑涉及核酸提取純化、文庫構建及測序反應等環(huán)節(jié)。其中，文庫構建與測序反應環(huán)節(jié)所用試劑組分繁多，這給監(jiān)管工作帶來了不小的挑戰(zhàn)。在實際監(jiān)管過程中發(fā)現(xiàn)，部分企業(yè)將本應歸為第三類體外診斷試劑的文庫構建試劑（含靶向探針）以第一類測序反應通用試劑名義進行備案，該做法模糊了產(chǎn)品的風險等級。為進一步加強NGS 相關體外診斷試劑的監(jiān)督管理，推動行業(yè)高質量發(fā)展，國家藥監(jiān)局特制定《指導原則》。該原則在參考國內外相關分類文件、依據(jù)《體外診斷試劑分類規(guī)則》[5-6] 確立分類框架的基礎上，針對監(jiān)管過程中存在的疑點和難點問題，通過文獻檢索、咨詢調研及專家研討等方式予以厘清和解決。

02NGS 技術與相關體外診斷試劑分類管理探討

2.1 NGS 技術

NGS 技術是繼 Sanger 測序技術后的一項革命性生物技術，能夠同時對數(shù)百萬甚至數(shù)十億個脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）片段進行測序，實現(xiàn)了大規(guī)模、高通量測序的目標。相較于其他測序技術，NGS 技術在速度、通量和價格方面均具有優(yōu)勢，而且可以同時對多個基因區(qū)域、多種類型基因變異進行識別和檢測。憑借這些優(yōu)勢，NGS技術在分子診斷、醫(yī)藥健康等多個領域展現(xiàn)出廣闊的應用前景[7-9]。

2.1.1 NGS 技術檢測流程概述

目前，國內外主流的NGS 技術，其核心檢測原理具有高度相似性（圖1）[7]，主要檢測流程包括核酸提取純化、片段化與文庫制備以及測序。其中，核酸提取純化過程相對獨立且容易理解，因此本文將重點闡述其他關鍵步驟。

《二代基因測序相關體外診斷試劑分類界定指導原則》探討

片段化與文庫制備。該步驟首先將待測的長鏈核酸，通過物理或酶學方法打斷為特定長度的短片段，這些短片段的長度范圍需嚴格匹配測序平臺的兼容性要求。隨后進行文庫制備， 即在片段化產(chǎn)物兩端連接必要的功能序列， 包括用于樣本多重識別與溯源的樣本標簽（Index或Barcode）、測序引物結合位點（Adapter） 等， 采用的試驗步驟主要有末端修復、加A尾、加接頭等，形成包含基因組信息的初始文庫。若檢測目標為特定基因區(qū)域， 則需在此階段應用靶向富集技術， 如探針雜交捕獲或目標區(qū)域多重聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR） 擴增， 從初始文庫中富集目的片段，從而得到以檢測目的片段為主的樣本文庫。

成簇和測序。在開展測序工作之前，需進行核酸提?。ɑ蚪MDNA）， 以酶切、超聲打斷或多重擴增等方式構建文庫，以添加接頭或靶向捕獲等方式通過PCR 技術（如滾環(huán)擴增、乳液擴增、橋式擴增等）對文庫中的單個DNA 片段進行克隆式擴增。該步驟利用測序試劑盒提供的酶與底物，在固相載體（如測序載片或芯片）上形成高密度、包含大量相同拷貝的片段簇（Cluster）。片段簇可直接在測序芯片上生成，也可以另行制備后再加載至芯片上，最終構成高密度DNA 陣列，為后續(xù)進行高靈敏度的信號檢測奠定基礎。測序過程是指對高密度DNA 陣列執(zhí)行循環(huán)生化反應與信號采集。該過程采用循環(huán)機制：首先進行酶促合成反應（依賴聚合酶或連接酶催化堿基特異性延伸），隨后執(zhí)行信號捕獲（光學平臺采集熒光/ 化學發(fā)光圖像，半導體平臺實時監(jiān)測氫離子濃度變化），經(jīng)多輪循環(huán)后，生成原始測序序列[10]。

2.1.2 NGS 相關體外診斷試劑

從技術層面上看，NGS 相關體外診斷試劑按核心功能單元，可以拆分為核酸提取純化、文庫構建、測序反應3 個模塊。雖然文庫構建試劑和測序反應通用試劑都有PCR 過程，且一般都包含引物、緩沖液、脫氧核苷三磷酸（deoxyribonucleoside triphosphate，dNTP）、DNA聚合酶、連接酶以及化學試劑等成分，但由于二者的主要作用不同，以及各自含有特有的組成成分或部件，因此是可明顯區(qū)分的（表1、表2）。

《二代基因測序相關體外診斷試劑分類界定指導原則》探討

《二代基因測序相關體外診斷試劑分類界定指導原則》探討

《二代基因測序相關體外診斷試劑分類界定指導原則》探討

2.2 文庫構建試劑分類界定要點

文庫構建試劑的主要作用是進行文庫制備，其組成成分通常涵蓋文庫構建過程中特有的片段化酶、片段化緩沖液、接頭、單/ 雙標簽序列引物（Index 或Barcode）、一/ 二輪擴增反應液、探針（或目標序列特異性引物）、捕獲磁珠或鏈霉親和素磁珠、洗脫反應液或洗脫緩沖液等。如果涉及核糖核酸（ribonucleicacid，RNA）建庫，建庫試劑盒還會包含逆轉錄酶或逆轉錄反應液。文庫構建試劑所包含的特異性引物或探針等關鍵組分，直接決定了檢測的準確性、特異性等核心性能指標，且相關試劑具有明確的臨床診斷性能，是檢測風險的主要來源，因此明確按照第三類體外診斷試劑對其進行管理。

《指導原則》強調，文庫構建試劑應能實現(xiàn)完整的文庫構建功能；同時，明確禁止將同一建庫流程中的試劑拆分為多個獨立試劑盒進行申報（如單獨申報僅包含靶向捕獲功能的試劑盒）。這一規(guī)定旨在確保該類高風險試劑管理的完整性和有效性。

2.3 測序反應通用試劑分類界定要點

測序反應通用試劑須在特定的NGS 平臺上使用，其主要功能是實現(xiàn)測序過程中的信號采集，最終獲取文庫樣本的序列信息。

在國際監(jiān)管層面，測序反應通用試劑， 在美國由食品藥品監(jiān)督管理局（Food and Drug Administration，F(xiàn)DA） 按照Class I 進行管理；在歐盟， 依據(jù)《體外診斷醫(yī)療器械法規(guī)》（In Vitro Diagnostic Medical Devices Regulation，IVDR）， 按照Class A 進行管理；在俄羅斯、加拿大、韓國、馬來西亞等其他主要國際市場，也均被劃定為低風險類別進行監(jiān)管。此類試劑的核心特性是平臺通用性和非檢測靶標特異性：一方面，僅適用于特定測序平臺所有類型的測序文庫；另一方面，僅包含測序過程必需的通用組分（涵蓋測序前必要預處理環(huán)節(jié)的試劑組分），但禁止含有任何靶標特異性序列或文庫構建組分（如樣本接頭等）。這類試劑風險相對較低，因此按照第一類體外診斷試劑進行管理。

2.4 注冊單元要點解析

測序反應通用試劑與文庫構建試劑配合使用方可完成測序功能，鼓勵二者組成同一注冊單元，共同申報第三類體外診斷試劑注冊。隨著技術不斷迭代升級，如當前已有儀器將文庫構建與測序功能整合于一體，預計此類集成化設計的應用將愈發(fā)普遍。

為了更具普適性和靈活性，《指導原則》允許測序反應通用試劑與文庫構建試劑作為不同單元分別進行申報，要求申請人應當從實現(xiàn)功能、技術特征、結構組成等角度，明確二者間的劃分。文庫構建試劑注冊時應當明確適配的測序反應通用試劑。測序反應通用試劑備案時應當明確適配的儀器品牌、型號（需適配已取得醫(yī)療器械注冊證的NGS 儀器）。

03《 指導原則》出臺對科學監(jiān)管的意義

通常情況下，文庫構建試劑與測序反應通用試劑在技術和專利歸屬等方面存在差異。文庫構建試劑由相關制造商基于檢測方向獨立研發(fā)；而測序反應通用試劑的開發(fā)與測序儀的硬件結構、液路系統(tǒng)、成像系統(tǒng)等高度適配，主要由測序平臺制造商負責開發(fā)和改進。《指導原則》的出臺，對于維護測序行業(yè)技術開發(fā)生態(tài)、推動測序技術創(chuàng)新發(fā)展具有重要意義，具體體現(xiàn)在以下3 個方面。

（1）采用技術功能分類法替代傳統(tǒng)的產(chǎn)品形態(tài)分類法，實現(xiàn)風險精細化管控和科學監(jiān)管政策延續(xù)?！吨笇г瓌t》明確將測序反應通用試劑作為獨立產(chǎn)品，按第一類體外診斷試劑進行管理，而非強制將其與第三類體外診斷試劑綁定。這一規(guī)定有效避免了強制合并注冊單元可能帶來的系統(tǒng)性風險，確保了合規(guī)的第三類文庫構建試劑注冊證依然有效，顯著降低了產(chǎn)業(yè)鏈重構風險，有力保障了合規(guī)企業(yè)生產(chǎn)經(jīng)營的連續(xù)性。

（2）分類邊界精細化，包容創(chuàng)新，實現(xiàn)管理類別界定清晰化與標準化?！吨笇г瓌t》厘清了原本模糊的技術邊界，明確了文庫構建試劑（第三類）與測序反應通用試劑（第一類）的功能區(qū)分，避免文庫構建試劑等組分混入測序反應通用試劑，精準打擊將第三類文庫構建試劑（含靶向探針）偽裝為第一類測序反應通用試劑等“高類低備”的亂象。

（3）平衡監(jiān)管剛性與發(fā)展彈性，引導產(chǎn)業(yè)高質量發(fā)展。《指導原則》為測序反應通用試劑增加了3 個入市門檻：一是要求配套使用的儀器需先獲批醫(yī)療器械注冊證；二是明確限定配套的適用機型范圍；三是規(guī)定測序反應通用試劑不得含有文庫構建功能，也不能與文庫構建試劑穿插使用。此外，《指導原則》通過規(guī)范測序反應通用試劑的備案要求，增加“限定條件”，降低了臨床濫用風險，遏制了市場失序行為。這一系列規(guī)定既保障了“提取- 建庫-測序”整體檢測流程的順暢進行，又滿足了臨床實際需求，有力引導了產(chǎn)業(yè)的高質量發(fā)展。

04結 語

《指導原則》通過科學合理的設計，進一步強化了風險管控力度，有效堵住了部分企業(yè)試圖以“高類低備”規(guī)避臨床確認與技術審評的監(jiān)管漏洞。其采用國際通行的獨立注冊單元管理模式，實現(xiàn)了我國醫(yī)療器械監(jiān)管與國際監(jiān)管標準的順利接軌。在實踐中，《指導原則》有利于平衡監(jiān)管剛性與發(fā)展彈性，為分類存疑的醫(yī)療器械分類管理提供了范式參考。同時，《指導原則》引導產(chǎn)業(yè)進行技術創(chuàng)新、技術競爭、技術出海，有力驅動了產(chǎn)業(yè)向高質量發(fā)展轉型，進而推動NGS 技術更廣泛地應用于臨床，造福更多患者。

本文由廣州佳譽醫(yī)療器械有限公司/佛山浩揚醫(yī)療器械有限公司聯(lián)合編輯